张女士和她的丈夫胡是大学同学,毕业后两人结婚.但是为了各自的事业,也因为在其他地方的关系,一直没有孩子.直到今年5月,张女士才发现自己怀孕了,但这个孩子是在安全期间怀孕的.
将含有管的EDTA离心机3008收集在母体血液样品(10mL)中并在3小时内分离.将血浆转移到普通的聚丙烯管中并通过离心3008收集在新管中.根据"Blood and?What?The humoral protocol"使用的1.5ml DNA略微修改QIAamp血液微型试剂盒(Qiagen)用于血浆样品提取.使用50微升水从柱上洗脱DNA.
尽管一些研究人员报道了使用ABI PRISM 7700序列分析仪(Applied Biosystems)对母体血浆进行DNA分析,但我们使用LightCycler(Roche Diagnostics),这是一种可靠的DNA定量方法.在Y染色体特异性序列中,DYS-14,雄性胎儿胎儿细胞的DNA用作量化的分子标记.在PCR反应体系中,扩增引物DYS 14-713F(5'-CAT CCA CGT CCC和DYS14-880R(5'-TTC CCC TTT GTT GTT葡萄糖耐量试验,看CCC CAA和双标荧光探针DYS14-) 883T(5'-FAM-CGA AGC CGA GCT GCC CAT CA-TAMRA-3').
光致发光PCR反应根据制造商的20微升反应体积和DNA站主荧光探针的所有组分和从试剂组获得的扩增引物的描述制备杂交探针.罗氏诊断).提取的血浆DNA(13.1微升)用作每个反应的模板.在热循环开始时,变性在95℃下进行10分钟,然后变性40个循环,在95℃变性10秒,退火57 [度]进行20秒并在72℃下延伸20秒.血浆样品中存在的DNA拷贝数由所用雄性基因组DNA的校准稀释曲线确定.
提取血液以检查胎儿性别,由于胎儿DNA和母体血浆中存在大量母体DNA,一般分析来自亲本的胎儿核苷酸序列不同于母体.雄性胎儿DNA具有Y染色体特异性序列.研究人员目前使用荧光定量PCR技术检测Y染色体上的特定基因,如SRY基因.如果检测到SRY基因,则意味着胎儿是男孩,否则它是女孩.
